2024-02-22 00:00:00來源：微譜生物科技瀏覽量：431
2024年1月31日，FDA正式發布 “Considerations for the Development of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cell Products”，為CAR-T細胞產品的開發提供了化學、制造和控制（CMC）、藥理學和毒理學以及腫瘤適應癥（包括血液系統惡性腫瘤和實體瘤）臨床研究設計的相關建議。
CAR-T 細胞制造涉及多種生物物料和復雜的多步驟程序，這些因素都是產品批間差異的潛在來源。因此，生產過程的控制以及適當的中間和批次放行檢測對于確保 CAR-T 細胞的安全性、質量和批間一致性至關重要。本期我們聚焦FDA最新版指南，深度解讀CAR-T 細胞產品CMC階段的五大注意事項！
CMC重點是產品安全和生產控制，產品生命全過程各關鍵節點的檢測項和驗收標準，以及如何應對開發階段的生產變更做出了詳細說明。2017年12月NMPA頒布的《細胞治療產品研究與評價技術指導原則（試行）》、2018年6月NIFDC頒發的《CAR-T細胞治療產品質量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》確定如何對CAR-T細胞治療產品在不同研發階段進行質量控制，保障產品全生命周期安全、有效和質量可靠。
—— 載體生產和檢測
2020年1月 “Chemistry, Manufacturing, and Control (CMC) Information for Human Gene Therapy Investigational New Drug Applications (INDs)”，即GT CMC指南，為載體的生產和檢測提供了建議。申請IND，必須根據cGMP標準生產載體，并且分析方法需驗證；申請BLA審查期間，載體生產設施將接受檢查。FDA建議描述載體結構、主細胞庫和工作細胞庫的表征和測試、參考物質的表征、載體生產和檢測以及載體穩定性。載體批次放行檢測應包括安全性、鑒定、純度和效價的測量。此外，FDA建議載體批次放行測試包括檢測載體濃度，優化T細胞轉導以確定每個細胞需要加入的載體量，以達到CAR-T細胞制劑中CAR陽性細胞的目標百分比。
GT CMC指南，圖源?| FDA官網
——?細胞起始材料的收集、處理和測試
由于供體差異，可能是批次間變異性的主要來源。FDA建議從收集到生產前階段，處理起始材料所用的工藝如2020年1月指南“GT CMC指南V.A.2.c.ii”部分所述，在所有白細胞分離收集地點都實施這些程序，應包括運輸過程和冷凍保存步驟的驗證，包括在預期條件下對白細胞分離起始材料穩定性的評估。建立白細胞分離起始材料的驗收標準，可以指定最少細胞數、活力和CD3+細胞百分比等。
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——?CAR-T細胞生產和檢測
2020年1月指南“GT CMC指南”中說明了生產體外修飾細胞的建議：早期產品表征（IV.A）、雜質特性（V.A.3.b.i和ii）、生產工藝開發（V.A.2.f和V.B.2.c）和設施考慮（V.C.1）。本指南為CAR-T細胞生產和檢測提供了具體建議和額外細節。
CAR-T細胞生產工藝控制
為了促進CAR-T細胞批次間的一致性，FDA建議對生產工藝進行良好控制，可以通過使用優質材料、CPP的過程中控制、過程中測試以及CQA中間體和最終產品的測試來實現。FDA建議人類或動物源性成分進行適當的外源性檢測。 在當前良好生產規范（CGMP）條件下，應使用經驗證的無菌工藝進行生產。IND應證明通過開發或工藝批次生產，按照擬定的制造工藝生產CAR-T細胞的能力，進一步支持產品安全性。一般來說，來自健康捐贈者的起始材料適用于生產工藝開發批次；當使用患者來源的起始材料時，可能建議對自體CAR-T細胞進行額外的生產工藝開發。CAR T細胞的過程中測試方案通常評估多個參數（例如，活力、細胞數量、細胞表型、CAR表達）。FDA建議對CAR T細胞進行穩定性研究，以支持2020年1月指南“GT CMC指南V.A.7和V.B.8”中所述的保持和儲存時間。另外，生產設備的運行參數應驗證以支持BLA。 CAR-T細胞分析檢測 對CAR-T細胞的分析檢測，目的在于確保產品的安全性、特性、質量、純度和強度（包括效力）。在2020年1月指南“GT CMC指南V.A.4和V.B.5”提供了Drug Substance (DS)和Drug Product (DP)分析測試的一般建議。V.A.4.b.i包括藥典測試替代方法的建議。V.A.5.b.i包括對新鮮制備細胞產品的建議，或在最終配方和患者給藥之間有限保持時間內使用的細胞產品的建議。
CAR-T細胞的標簽
IND產品必須貼上標簽，并注明“警告：新藥——受美國法律限制用于研究用途”。FDA建議標簽包括產品名稱、制造商信息以及“請勿過濾”和“請勿輻照”警告。用自體起始材料制造的CAR-T細胞必須貼上“僅供自體使用”的標簽。根據對自體起始材料進行的供體檢測和篩查，自體CAR-T細胞的標簽必須注明“未評估感染性物質”，除非已根據21 CFR 1271.75、21 CFR 1271.80和21 CFR 1271.85（21 CFR 1271.90(c)(2)）進行了所有其他適用的篩查和檢測。如果進行的篩查或測試結果表明存在相關傳染病病原體和/或相關風險因素或臨床證據，則CAR T細胞也必須貼上21 CFR 1271.3(h)中所示的生物危害圖例。如果CAR-T細胞表達多個轉基因元件，則效價測定應測量每個功能元件的活性。
—— CAR-T細胞產品生命周期內生產變更管理和可比性評估
CAR-T細胞產品生命周期中的變化，包括最終容器、培養過程中使用的細胞因子或細胞擴增持續時間的變化，都可能會影響產品質量、安全性、功效或穩定性，FDA建議申請人在考慮此類變更時與OTAT溝通。
在規劃此類變更時，一般建議申請人考慮以下事項：
1）載體生產過程的重大變化（例如，從貼壁培養到懸浮培養）應得到可比性研究的支持，評估此類變更對載體和CAR-T細胞的影響，應包括對變化前后載體的并行分析。
2）對于培養基中生長因子或添加物濃度或類型的變化，應進行更穩健的可比性研究。
3）當CAR-T細胞或載體生產設施發生變化時，應建立生產設施之間的可比性。
變更管理
關鍵實施及產品開發階段變更，應進行風險評估，該風險評估應告知是否需要進行分析性可比性研究。FDA建議在啟動可比性研究或實施變更之前，將擬議變更的細節、伴隨的風險評估和擬議變更管理策略作為修訂提交到IND，建議申請人與OTAT討論研究設計和驗收標準。可根據ICH Q5E中描述的一般原則，評估CAR-T細胞變化前后的分析可比性。
如果沒有足夠的證據證明分析的可比性，則可能需要進行新的非臨床或臨床研究，這可能會推遲產品批準。如果開發后期變更，且沒有支持BLA的額外臨床研究計劃，則分析可比性研究應與批準產品進行的研究一樣全面和徹底。
可比性研究設計
FDA建議，擬議的分析方法適用于檢測變更對產品安全性和有效性的潛在影響。用擬議變更生產的產品能滿足當前放行標準的證明通常不足以建立可比性。應使用適當的統計方法和預定義的驗收標準進行分析。進行批次放行測試的屬性外，還應使用可靠的分析方法監測各種產品屬性，包括細胞表面標記。
由于自體CAR-T細胞的細胞起始材料固有的變異性，使用歷史批次來評估可比性可能不夠。FDA建議盡可能使用相同的細胞起始材料，通過并行測試來評估CAR-T細胞的可比性。如使用來自健康供體的CAR T細胞進行可比性研究，當健康供體生產的產品不足以評估自體CAR-T細胞的產品可比性，可比性研究還應包括對由患者細胞起始材料生產的CAR T細胞的評估。
—— 單中心或多中心生產
單點生產
收集細胞起始材料，并將其運送集中生產點生產CAR T細胞。CAR-T細胞隨后被運送到本地或遠程臨床地點進行給藥。單點生產可能降低因設施之間差異而產生的產品可變性。
多中心生產
多中心生產可以縮短從細胞起始材料收集到自體產品給藥時間；然而，制造設施之間差異可能會導致產品可變性，申請人應該證明在每個中心生產的產品有可比性，以支持臨床試驗結果分析。FDA建議在可能的情況下，在整個生產設施中使用相同的標準操作程序（SOP）、培訓、試劑和設備，還建議IND描述各生產場所制造過程中的任何差異。FDA建議提交數據，最好是來自使用相同細胞起始材料在每個中心進行鑒定，以證明每個中心生產的產品的分析可比性，包括用于測試的方法列表和用于確定分析可比性的預定義驗收標準。
多中心測試
FDA建議使用分析轉移方案以確保在每個測試點進行的非藥典試驗適用于預期目的，并且在所有測試間可重復, 例如，流式細胞術。FDA建議在可能的情況下，在測試點中使用相同的SOP、試劑和設備。
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