《熒光PCR技術常見困擾專題》進入第三篇，繼之前的污染和交叉后，本期我們談談qPCR實驗的又一個重要影響因素：抑制物。

熒光PCR的主要功能性成分為DNA聚合酶，常用的為Taq DNA聚合酶。該酶具有5'-3'端DNA聚合酶功能和3'-5'核酸外切酶活性，此外Taq酶還需要有Mg2+作為輔助因子激活。一些常見的生物體液樣本、細胞/細菌培養液、疫苗/蛋白/酶發酵液等樣本含有大量的雜蛋白、無機鹽和其他化學試劑。這些試劑如果作為待檢測樣本，如果無法將上述抑制物去除，輕則會導致曲線異常，重則會呈現假陰性結果。

被抑制的陽性擴增曲線和陰性擴增曲線如圖1和圖2所示，圖3是一個無抑制的陽性擴增曲線。圖1和圖2顯示了一個共同的特點就是基線期不平滑且有擴增后期上揚（非正常擴增）的情況出現。

▲ 圖1 | 被抑制的陽性擴增曲線

▲ 圖2 | 被抑制的陰性擴增曲線

▲ 圖3 | 無抑制的陽性擴增曲線

｜常見的熒光PCR抑制物有哪些？

｜如何解決抑制問題？