CGT作為最新的生物藥品比起重組蛋白、單抗等成熟生物制品在生物安全性控制方面具有更大的工藝復雜性及產品獨特性。除了產品生產的源頭為不同種類的細胞外、工藝的多樣性導致往往很難對于每個產品的生物安全性控制策略采取標準化一刀切的判斷方式。產品開發者必須按照對于原始細胞株來源與制備過程的了解，及目標市場藥監及其他監管機構的要求做全面的風險評估，然后按照風險的嚴重等級采取系統化的控制。生物安全風險分成幾大類，其中最復雜的、尤其是針對CGT產品而言是病毒安全性控制。

生物制品的病毒污染風險分成內源病毒、外源病毒、輔助病毒。其中、內源病毒為生產體系從設計而自帶的病毒風險，外源病毒為生產過程中可能引進的病毒風險。由于CGT產品的原始細胞株一般是人源或猴源的細胞株、包括293系列、Vero、iPSC、間充質干細胞等，每一種又有不同細分來源，生物藥行業對于這些細胞系的安全性研究總體來說還不夠全面、所以這些病毒對于生產車間人員及臨床實驗供試者的潛在生物安全危害必須要通過大量質量風險評估基礎上的合適病毒檢測來證明可以得到有效控制。與其它傳統生物制品的共性之一，是CGT產品的細胞株及GMP細胞庫開發及擴增過程中大多會用到動物來源的關鍵物料，比如胎牛血清（牛源）以及胰酶（豬源）等，由此帶來一些動物源性的病毒因子到終產品并通過給藥渠道被輸送至使用者體內，從而會導致相關傳染性疾病的發生，這個后果除了給患者造成身體損害，也給生物制藥生產企業造成巨大壓力以及經濟損失。所以，CGT產品所牽涉的主細胞庫（MCB）、工作細胞庫（WCB）、終末細胞（EOPC）及純化前上清液（UPB）都需要做嚴格的病毒檢測。除此以外，生物制品及其相關生產基質及中間產品等也需要進行行之有效的病毒檢測，所有這些檢測是生物制藥行業質量控制的重要指標。細胞庫只有完成這些檢測后才能用于GMP生產。

最新的ICHQ5A(R2)對于生物制品的細胞庫檢測列出以下幾大類（附圖Table1）：CGT產品研究者必須針對自身產品的起始細胞株來源、構建、培養過程及細胞庫建設的環境、物料及其他流程來評判內源病毒、外源病毒、輔助病毒的種類和污染風險，并對于可能有的病毒在最終CGT產品中存在與否、及數量多少進行科學及檢測方法學的研究，檢測方法必須通過驗證證明其專屬性和靈敏度能夠達到保障生物制品生物安全性的要求。

其中需要特別指出的是，在ICHQ5A（R2）專門針對NGS方法進行了說明。具體如下： NGS（也稱為高通量測序）可用于廣泛的病毒檢測。NGS可以提供確定的病毒檢測靈敏度和廣度，并可以減少動物使用和測試時間。對于使用的任何NGS方法，應提供驗證包以支持其在應用中的使用。這包括方法驗證和分析方法確認或基質特異性的確認（視情況而定）。基于潛在的安全問題，生物信息學分析可以針對特定病毒，也可以針對未知病毒檢測。NGS可以用廣譜病毒檢測來替代體內實驗，以檢測未知或未曾預見的病毒種類。NGS還可以補充或替代體外細胞培養試驗，以檢測已知和未知或未曾預見的病毒種類。此外，該測定也可用于檢測已知病毒，并且它可替代HAP、MAP和RAP試驗以及其他病毒特異性PCR測定。

NGS 的使用可在以下情形下被特別考慮：檢測或表征細胞基質或細胞庫中已知和未知病毒，病毒種子或者病毒收獲液中由于沒有有效的中和載體病毒措施而對檢測產生干擾時，或者產品本身毒性或培養基組分存在毒性時。

ICHQ5A R2 Table 1. Virus Tests Recommended to Be Performed Once at Various Cell Levels  （建議在不同細胞水平進行一次病毒檢測）

a. 應按上表所述對每個WCB進行外源病毒測試。適當時，如果在MCB上進行了外源病毒檢測，并且培養至LIVCA或LIVCA以上的細胞來自WCB并用于檢測外源病毒的存在，則可省略對初始WCB的類似檢測。通常不建議WCB進行抗體產生實驗。在每個WCB上而不是在MCB上進行完整檢測的替代方案也是可以接受的。

b. 限定代次細胞：用于生產的達到培養限定代次的細胞（Cells at the Limit of In Vitro Cell Age Used for Production）

c. 也可能檢測到其他病毒

d. 如果已知一種細胞系組成性地產生逆轉錄病毒顆粒，則可能不需要該檢測

e. 適用于已知已被此類病毒感染過的細胞系

f. 體外病毒檢測直接在WCB或直接源自該WCB的LIVCA細胞上進行。基于風險評估，使用NGS進行病毒檢測可以用作體外檢測（細胞培養法和PCR法）的補充或替代檢測

g. 可根據風險評估進行體內法檢測。然而，體內實驗對于表征良好的細胞系是非必須的，如CHO、NS0和SP2/0，具體需要根據細胞系歷史，先驗知識以及其他基于風險的考慮。這包括原始（親本）未轉染細胞系的體內病毒試驗或NGS試驗以及從原始細胞庫衍生MCB的控制。還應考慮對來自同一原始細胞庫的其他MCB進行病毒安全性測試的先驗知識，包括用于建立MCB的方法。如果第一個WCB或后續WCB是在批準的受控條件下準備的，則通常不需要進行測試。對于LIVCA的細胞，基于先前的知識和其他基于風險的考慮，可能不需要進行測試。如果殘留風險仍然存在，可以考慮保留體內檢測或用檢測廣泛病毒的分子生物學方法（如NGS或PCR）替換，以檢測可能在MCB建立期間或LIVCA階段細胞培養期間引入的病毒。

h. 例如MAP、RAP、HAP，其通常適用于嚙齒動物細胞系。病毒特異性PCR或靶向分子方法可以用作動物試驗的替代

i. 例如基于細胞系的起源和歷史，包括相關的原材料和試劑

j. 適用時，應考慮使用NGS替代體內試驗，并可根據試驗適用性和風險評估，用于補充或替代體外試驗和其他病毒特異性試驗

CGT產品常見的內源病毒包括逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、慢病毒等，每一種的風險點不同、檢測方法也都有所不同、有的病毒需要2-3種不同方法結合使用才能完成安全性檢測。慢病毒在CGT上市產品中既被當作最終產品、又廣泛被當作基因編輯的載體來用，慢病毒的最大生物安全性風險是在細胞庫構建及生產工藝步驟中產生載體部件重組、造成野生型可復制性慢病毒(RCL)的產生，從而對受試者的安全造成嚴重后果。所以，可復制性慢病毒RCL檢測是中美歐藥監機構統一要求并強調的生物安全性檢測項。

隨著CGT生產用物料來源的多樣性和非GMP級別特質，工藝的非標準化，行業多處于臨床早期階段，如何正確判斷外源病毒因子的污染風險尤其具有挑戰，企業必須具有技術和質量專業人員能夠結合法規、指南要求來系統分析所用細胞株/細胞庫涉及的具體供應鏈生產全流程從而制定對于外源病毒檢測的方案，然后開展方法學研究和驗證等，才能對細胞庫進行放行前所需做的檢測并結果符合質量標準。CGT產品與傳統重組蛋白如單抗等在檢測樣品種類方面有著本質上的區別，傳統重組蛋白所最常用的CHO細胞系的病毒檢測經驗不能簡單套用，例如，細胞混合液和病毒上清等在檢測時如何處理都是復雜的問題，不能輕易套用重組蛋白的方法學，否則會出現假陰性或假陽性的檢測結果，造成產品安全性風險。所以，CGT檢測技術的個性化和試用性考察不容忽視。外源病毒檢測方法又分體外和體內檢測兩大類：體外檢測方法根據細胞株/庫的來源分成一般、牛源、豬源、人源、猴源等病毒檢測，每一種種屬又分成多種病原體與指示細胞的合理組合和對應反應的測定來最終完成，可謂復雜的系統工程；傳統的體內檢測方法一般會用到幾種不同的動物類型及胚胎與病原體的結合。完成體內體外病毒檢測需要長期的生物藥產業化經驗和技術平臺的搭建、實驗系統的合規性必須從實驗室設計、質量體系（需要GMP）、人員資質、檢測細胞來源及質量控制、試劑耗材管理等多方面達到藥監機構要求，在這些前提下的檢測方法及方法驗證和檢測數據才能被監管機構認可作為可以用來做CGT臨床或商業化樣品GMP生產的原始細胞庫。

由于生物制品細胞庫，尤其是CGT產品的細胞庫的生物安全性保障直接關系到最終產品的生物安全性，而病毒的風險尤其復雜，需要高度專業性團隊的支持。另外，用于多種病毒檢測的活病毒對于CGT生產企業的設施設備有直接污染風險、歐美生物制藥企業和市場一般對于細胞庫的檢測采用委托第三方有資質及有經驗的服務方來完成。制藥企業在選擇第三方檢測公司時務必要關注以上所提及的所有要求，以避免因為第三方檢測實驗室不合規或技術不成熟造成的病毒檢測缺陷項。

中國CGT行業細胞庫的檢測服務商目前所面臨的3個主要挑戰來自于：1）技術方面的挑戰，外源病毒檢測對于不同產品的需求復雜及多樣化，目前主要CGT產品種類的病毒檢測涉及超過近70種常用內外源病毒的檢測方法；2)法規方面的挑戰，以中、美藥監機構對于體外法外源病毒因子檢測基本思路是一致的，但是在用于各自區域申報時，涉及到檢測用的具體病毒和指示細胞種類是有區別的，這個狀況讓一些有意在中、美同時申報的生物制藥企業面臨著比較糾結的局面；3)GMP執行不到位，藥品監管機構對于生物制品的監管愈加嚴格，細胞庫放行檢測中任何GMP合規執行的不到位，都會導致制藥企業前期辛苦的研發前功盡棄。因此，選擇合適的有資質的供應商將對CGT產品質量安全和海外申報的順利與否產生重要的影響。